معلومة

عمل EDTA

عمل EDTA


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

أعلم أن EDTA يخلب أيونات المعادن. يضعف جدار الخلية البكتيرية ويعطل DNases.

ما هو سبب قدرتها على القيام بذلك؟ أعتقد أنه يمكن أن يعطل DNases عن طريق تغيير البيئة المكروية. ماذا يحدث بالضبط؟


يتم تثبيت طبقة عديدات السكاريد الدهنية لجدار الخلية البكتيرية سالبة الجرام بواسطة الكاتيونات ثنائية التكافؤ. معظم الوصفات للاضطراب بكتريا قولونية تتضمن الخلايا Tris-EDTA لهذا السبب. يبدو أنني فقط أعرف هذا ، لذلك لا يوجد مرجع في الوقت الحالي.

تتطلب جميع نوكليازات المغنيسيوم2+، وهذا هو سبب إضافة EDTA في المخزن المؤقت للإيقاف إلى هضم التقييد. يمكن أن يؤدي نقل EDTA في كريات الحمض النووي في بعض الأحيان إلى تثبيط الهضم.


تحتاج الكثير من الإنزيمات إلى أيون معدني في مركزها النشط (هو في الواقع أيون المعدن الذي يشارك في التفاعل المحفز). هذه هي المنغنيز والمغنيسيوم والنحاس وهلم جرا. بالنسبة للحمض النووي ، فإن المعدن الموجود في المركز النشط هو المغنيسيوم و EDTA ببساطة تخلب هذه الأيونات ، مما يجعلها غير متاحة للإنزيم وبالتالي يعيق عمل الإنزيم.

عملية إزالة معدن ثقيل هي العملية التي يتم فيها تنسيق أيونات المعادن في الجزيئات وتشكيل روابط تنسيق مع عامل مخلب. يبدو EDTA مثل هذا:

الهيكل ثلاثي الأبعاد أثناء تخليب أيونات معدنية مثل هذا:

يمكنك أن ترى أن أيون المعدن يقع بشكل جيد بين ذرات الأكسجين سالبة الشحنة وذرات النيتروجين. هذه المجمعات مستقرة إلى حد ما ولا تهرب أيونات المعادن.


حمض الأسيتيك الإيثيلي الدياميني

حمض الأسيتيك الإيثيلي الدياميني (EDTA) عبارة عن حمض أمينوبولي كربوكسيلي مع الصيغة [CH2N (CH2كو2ح)2]2. تستخدم هذه المادة الصلبة البيضاء القابلة للذوبان في الماء على نطاق واسع لربط أيونات الحديد والكالسيوم. يربط هذه الأيونات كعامل مخلب سداسي الأسنان ("ستة أسنان"). يتم إنتاج EDTA على شكل أملاح عديدة ، على وجه الخصوص ثنائي الصوديوم EDTA، إيديتات الكالسيوم الصوديوم ، ورباعي الصوديوم EDTA. [4]

  • حمض الأسيتيك الإيثيلي الدياميني
  • ن,ن′ -Ethane-1،2-diylbis [ن- (كاربوكسيميثيل) جلايسين] [1]
  • حمض ديامينوثان - تتراسيتيك
  • حمض إيديتيك (إيديتات القاعدة المترافقة) (INN ، USAN)
  • فيرسين
  • 60-00-4 (حمض مجاني) ذ
  • 6381-92-6 (ملح ثنائي هيدرات ثنائي الصوديوم) Y
  • تشيبي: 42191 ذ
  • ChEMBL858 واي
  • 5826 ذ
  • DB00974 ص
  • D00052 ذ
  • 9G34HU7RV0 ص
  • 7FLD91C86K (ملح ثنائي هيدرات الصوديوم) Y
InChI = 1S / C10H16N2O8 / c13-7 (14) 3-11 (4-8 (15) 16) 1-2-12 (5-9 (17) 18) 6-10 (19) 20 / h1-6H2 ، (H، 13،14) (H، 15،16) (H، 17،18) (H، 19،20) Y Key: KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N Y

المواد والأساليب

المواد

كانت أجهزة Amicon فائقة الترشيح (10K مقطوعة) من Millipore. كانت أعمدة PD-SpinTrap G-25 من GE Healthcare. كانت أجهزة غسيل الكلى Slide-A-Lyzer MINI (مقطوعة 20 كيلو بايت) من Thermo. 96 طبق جيد من فالكون. كان فيمينتين الهامستر المؤتلف من Cytoskeleton، Inc. كان الفيمنتين البشري المؤتلف من Biomedal (إشبيلية ، إسبانيا). كانت الكواشف الأخرى من أعلى مستويات الجودة من سيجما.

غسيل الكلى بالبروتين

الألبومين المصل البقري (BSA) عند 1 مجم / مل في أنابيب 5 ملي مولار ، تم غسيل درجة الحموضة 7.0 التي تحتوي على 1 مم EDTA مقابل أنابيب 5 مم ، 1 مم DTT ، درجة الحموضة 7.0 مع أربعة تغييرات في المخزن المؤقت ، وبعد ذلك ، إلى أنابيب 5 ملي مولار ، 0.25 مم DTT ، درجة الحموضة 7.0 مع تغييرين. يتبع غسيل الكلى للفيمنتين بروتوكول إعادة التشكيل القياسي [8]. باختصار ، تعرض البروتين المؤتلف البشري عند 1 مجم / مل في 5 ملي مولار من حمض الهيدروكلوريك ، ودرجة الحموضة 7.6 ، يحتوي على 8 م يوريا ، 1 مم EDTA ، 10 ملي مولار- مركابتوإيثانول ، 0.4 ملي مولار PMSF وحوالي 150 ملي بوكل كلوريد ، تعرض لخطوة- غسيل الكلى الحكيم مقابل 5 ملي أنابيب pH 7.0 ، 1 ملي DTT تحتوي على 6 م يوريا ، ثم 4 م يوريا ، 2 م يوريا ولا يوريا عند درجة حرارة الغرفة ، وأخيراً ، إلى خطوتين إضافيتين مقابل 5 مم أنابيب ، درجة الحموضة 7.0 ، 0.25 ملي مولار DTT ، الأخير لمدة 16 ساعة عند 16 درجة مئوية.

الترشيح الهلامي بعمود الدوران والترشيح الفائق

تم إجراء الترشيح الهلامي باستخدام أعمدة PD SpinTrap G-25 سعة 1 مل معادلة بأنابيب 5 مم ، 0.1 ملي مولار DTT ، درجة الحموضة 7.0 ، قبل تحميل 140 ميكرولتر من عينات الفيمنتين أو BSA والتصفية وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة. بالنسبة للترشيح الفائق ، تم تخفيف عينات BSA أو vimentin (250 ميكرولتر) التي تحتوي على 1 ملي EDTA 10 أضعاف باستخدام محلول مؤقت خالٍ من EDTA ، وتم تطبيقه على وحدات مرشح Millipore Amicon Ultra (حجم مسام 10 K) وطردها عند 3000xg لمدة 15 دقيقة عند 16 درجة مئوية ، والتي ركزت العينات وصولاً إلى حجمها الأصلي. بعد ذلك ، تم تخفيف العينات مرة أخرى 10 أضعاف باستخدام محلول بدون EDTA وتكرر الإجراء.

التقدير اللوني لتركيز EDTA

تم تقدير تركيز EDTA في محاليل البروتين من خلال اختبار قياس الألوان من خلال مراقبة المنافسة باستخدام 4- (2-pyridylazo) -resorcinol (PAR) لربط الزنك. يشكل ارتباط الزنك بـ PAR مركبًا ملونًا بامتصاص عند 492 نانومتر [11]. يؤدي وجود EDTA إلى انخفاض في تكوين هذا المركب. تم الحصول على منحنى معايرة عن طريق معايرة العينات التي تحتوي على 100 ميكرومتر PAR و 10 ميكرومتر Zn مع تركيزات معروفة من EDTA وقياس الامتصاصية عند 492 نانومتر ، باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية Varioskan Flash (Thermo). تم تحديد كمية EDTA في مستحضرات البروتين من امتصاصها عند 492 نانومتر بعد الحضانة بـ 100 ميكرومتر PAR و 10 ميكرومتر Zn ، والاستقراء باستخدام منحنى المعايرة. تم استخدام أحجام عينة من 1 إلى 10 ميكرولتر في حجم فحص إجمالي نموذجي يبلغ 100 ميكرولتر. تم إجراء القياسات بعد 5 دقائق من خلط الكواشف.

تحليل الرنين المغناطيسي النووي

تم الحصول على أطياف الرنين المغناطيسي النووي في بروكر أفانس 500 ميجاهرتز مجهز بمسبار SEF 19F-1H أو بروكر أفانس 600 ميجاهرتز مجهز بمسبار TXI بالرنين الثلاثي المبرد. في حالة العينات المذابة في المخزن المؤقت المذاب (20 مللي مولار من Tris ، Cambridge Isotope ، المملكة المتحدة) ، تم الحصول على الأطياف بتسلسل نبضي بسيط بزاوية 90 درجة (تسلسل نبضات Zg Bruker) وبنقاط بيانات 32K وتأخير استرداد لمدة ثانيتين و 10 جزء في المليون من العرض الطيفي المتمركز عند 4.7 جزء في المليون (التحول الكيميائي لإشارة HDO المتبقية). في حالة العينات المذابة في محاليل غير منزوعة الذائبة ، تمت إضافة حجم 10٪ من الماء المفسد لقفل إشارة الديوتيريوم وتم استخدام تسلسل نبضات بروكر القياسي "zgesgp" باستخدام تدرجات نحت الإثارة لإخماد إشارة الماء. تم الحصول على الأطياف عند 25 درجة مئوية مع 32 ألف نقطة وتأخير استرداد لمدة ثانيتين و 14 جزء في المليون من العرض الطيفي المتمركز عند 4.7 جزء في المليون (التحول الكيميائي للماء). تم الحصول على الأطياف باستخدام من 8 إلى 2048 مسحًا اعتمادًا على تركيز العينة ، ولم يتم تطبيق توسيع الخط في المعالجة. تم استخدام برنامج Bruker TOPSPIN لاقتناء ومعالجة الأطياف. لاختبار تبعية الرقم الهيدروجيني لإشارات التحول الكيميائي لـ EDTA ، تم تحضير عينات من 1 إلى 3 ملي مولار EDTA ، مع وبدون الكاتيون (Ca 2+ أو Zn 2+ أو Mg 2+ أو La 3+) ، في 20 مم تم تحضير Tris في درجة حموضة مختلفة (بين 5 و 9) عن طريق التحميض بحمض الهيدروكلوريك المزيل. تم قياس الأس الهيدروجيني الفعلي بعد إضافة ملح ثنائي كلوريد المقابل لكل كاتيون. EDTA و ZnCl2 تم تحضير المحاليل في ماء منزوع الدهن.


إضافات

اعتمادًا على البروتين المستهدف ، قد يكون من الضروري إضافة مركبات إلى المخزن المؤقت للتحلل:

الاكثر استخداما المضافات، وتركيزاتها الفعالة ، والغرض العام منها مذكورة في الجدول أدناه.

استخدم المواد المضافة فقط عندما يكون ذلك ضروريًا حقًا!

فئة المادة المضافة مثال تركيز غرض
أملاح كلوريد الصوديوم ، بوكل ، (NH4)2وبالتالي4 50-150 ملم الحفاظ على القوة الأيونية المتوسطة
منظفات ديوكسيكولاتي ،
تريتون اكس 100
0.1-1% ذوبان البروتينات ضعيفة الذوبان
الجلسرين 5-10% استقرار
الجلوكوز أو السكروز 25 ملم استقرار الأغشية الليزوزيمالية ، وتقليل إطلاق البروتياز
مخلبات المعادن EDTA ، EGTA 1 ملم تقليل أضرار الأكسدة ، أيونات المعادن المخلبة
تقليل الوكلاء DTT ، DTE
2-ميركابتويثانول
1-10 ملم
0.05%
تقليل أضرار الأكسدة
يجند ، أيونات معدنية ملغ 2+ ، ATP ، GTP 1-10 ملم استقرار

فئة مهمة من المواد المضافة هي مثبطات الأنزيم البروتيني. بشكل عام ، يؤدي اضطراب الخلية إلى إطلاق الإنزيمات المحللة للبروتين والتي يمكن أن تقلل من العائد الكلي. للتحكم في هذا التحلل البروتيني غير المرغوب فيه ، قد يكون من الضروري إضافة مزيج من مثبطات الأنزيم البروتيني إلى تعليق الخلية. نظرًا لأن العديد من هذه المركبات ليست مستقرة جدًا في المحاليل المائية ، فمن المهم إضافتها إلى محلول التحلل من محلول مخزون في مذيب عضوي (ميثانول أو إيثانول أو أيزوبروبانول أو DMSO) مباشرة قبل الاستخدام.

مثبط البروتياز تركيز اضرب الأسهم. مذيب تثبيط
ابروتينين 1-2 ميكروغرام / مل 10 مجم / مل ماء سيرين بروتياز
بنزاميدين 15 ميكروغرام / مل 10 مجم / مل ماء سيرين بروتياز
EDTA ، EGTA 1-10 ملم 0.5 م (الرقم الهيدروجيني 8) ماء البروتياز المعدني
ليوببتين 1-2 ميكروغرام / مل 10 مجم / مل ماء سيستين وسيرين بروتياز
PMSF 0.1-1.0 ملم 100 ملم الأيزوبروبانول سيرين بروتياز
بيبستاتين أ 1 & ميكروغرام / مل 1 مجم / مل الميثانول بروتياز الأسبارتيك

  • PMSF (فينيل ميثيل سلفونيل فلوريد) له فترة نصف عمر قصيرة في المحاليل المائية. يجب عمل محلول مخزون 100 ملي من الأيزوبروبانول وتخفيفه في المخزن المؤقت مباشرة قبل الاستخدام. بيفابلوك هو بديل أقل سمية وأكثر ذوبانًا وثباتًا لـ PMSF.
  • لا يتوافق استخدام EDTA و EGTA مع وجود أيونات Mg 2+ (مطلوبة لربط النوكليوتيدات) في المخزن المؤقت أو مع كروماتوجرافيا التقارب على أعمدة Ni 2+.

عمل EDTA - علم الأحياء

علم الاحياء كامبل الفصل 47 (powell_h)

1) تشبه بنية جين ذبابة الفاكهة المسمى Tinman الجين الموجود في البشر أيضًا
أ) يعزز نمو الأذن.
ب) يحدد مكان القلب.
ج) يحدد التراكيب في العيون.
د) يحدد نقاط استطالة الأطراف.
هـ) ترشيح السائل اللمفاوي.

2) مع تطور الجنين ، يتم إنتاج خلايا جديدة نتيجة لذلك
أ) التمايز.
ب) التشكيل.
ج) انقسام الخلايا.
د) التشكل.
ه) التخلق.

3) يشبه إخصاب البويضة بدون تنشيط
أ) وضع المفتاح في اشتعال السيارة مع عدم بدء تشغيل المحرك.
ب) يستريح خلال الشوط الأول من مباراة كرة السلة.
ج) تحضير فطيرة من الصفر وخبزها في الفرن.
د) المشي إلى الكافتيريا وتناول الغداء.
هـ) إسقاط صخرة من جرف ومشاهدتها تهبط في الوادي أدناه.

4) اتصال الحيوانات المنوية بجزيئات الإشارة في غلاف البويضة يؤدي إلى خضوع الحيوانات المنوية
أ) الانقسام.
ب) نزع الاستقطاب.
ج) موت الخلايا المبرمج.
د) التكوُّن.
ه) رد الفعل الاخر.

5) حتى في حالة عدم وجود الحيوانات المنوية ، يمكن تنشيط النشاط الأيضي في البويضة بشكل مصطنع
أ) مستويات عالية بشكل غير طبيعي من حمض الكربونيك في العصارة الخلوية.
ب) مستويات منخفضة بشكل غير طبيعي من الأكسجين خارج الخلية.
ج) حقن أيونات الكالسيوم في العصارة الخلوية.
د) التعرض لانخفاض درجة الحموضة في الرحم.
ه) نضوب إمدادات ATP الخاصة بها.

6) يتطلب تكوين غشاء الإخصاب زيادة في توافره
أ) أيونات البيكربونات.
ب) أيونات الكالسيوم.
ج) أيونات الهيدروجين.
د) أيونات البوتاسيوم.
ه) أيونات الصوديوم.

7) تخضع ملقحة قنفذ البحر لأول انقسام خلوي لها
أ) 5 ثوان بعد الإخصاب.
ب) 30 دقيقة بعد الإخصاب.
ج) 90 دقيقة بعد الإخصاب.
د) 4 ساعات بعد الإخصاب.
هـ) 24 ساعة بعد الإخصاب.

8) يخضع الزيجوت البشري لأول انقسام خلوي
أ) 5 ثوان بعد الإخصاب.
ب) 30 دقيقة بعد الإخصاب.
ج) 90 دقيقة بعد الإخصاب.
د) 4 ساعات بعد الإخصاب.
هـ) 24 ساعة بعد الإخصاب.

9) هناك فرق تناسلي بين قنافذ البحر والبشر
أ) تكمل بيضة قنفذ البحر الانقسام الاختزالي قبل الإخصاب ، لكن الانقسام الاختزالي عند الإنسان يكتمل بعد الإخصاب.
ب) يتم إنتاج بيض قنفذ البحر عن طريق الانقسام الاختزالي ، ولكن يتم إنتاج بيض الإنسان عن طريق الانقسام.
ج) بيض قنفذ البحر والحيوانات المنوية متساويان في الحجم ، لكن البويضات البشرية أكبر بكثير من الحيوانات المنوية البشرية.
د) تحتاج قنافذ البحر ، وليس البشر ، إلى منع تعدد النطاف لأنه في قنافذ البحر فقط يمكن أن يكون هناك أكثر من مصدر واحد للحيوانات المنوية لتخصيب البيض.
هـ) تحصل ملقحات قنفذ البحر على الميتوكوندريا الخاصة بها من الحيوانات المنوية ولكن البيضة الملقحة تحصل على الميتوكوندريا الخاصة بها من البويضة.

10) يؤدي ملامسة بيضة قنفذ البحر بجزيئات الإشارة على الحيوانات المنوية إلى خضوع البويضة لفترة وجيزة
أ) الانقسام.
ب) إزالة الاستقطاب من الغشاء.
ج) موت الخلايا المبرمج.
د) التكوُّن.
ه) رد فعل جسيم.

11) أثناء الإخصاب ، محتويات الأكروسومال
أ) كتلة polyspermy.
ب) تساعد في دفع المزيد من الحيوانات المنوية نحو البويضة.
ج) هضم طبقة الهلام الواقية على سطح البيضة.
د) تغذي الميتوكوندريا في الحيوانات المنوية.
هـ) يؤدي إلى اكتمال الانقسام الاختزالي بواسطة الحيوانات المنوية.

12) الطبقة المحية لبيض قنفذ البحر
أ) خارج غشاء الإخصاب.
ب) يطلق الكالسيوم الذي يبدأ التفاعل القشري.
ج) يحتوي على جزيئات مستقبلات خاصة ببروتينات الدم المترابطة.
D) يكون مرئيًا لأول مرة فقط عندما يكتمل تكوين الأعضاء تقريبًا.
E) عبارة عن شبكة من البروتينات تعبر العصارة الخلوية للبيضة.

13) في البويضة الملقحة حديثًا ، الطبقة المحية
أ) يفتح الغشاء النووي للبويضة للسماح بدخول الحمض النووي للحيوان المنوي أحادي الصبغة.
ب) تصلب لتشكيل غطاء واقي.
ج) يفرز الهرمونات التي تعزز تكوين الستيرويد عن طريق المبيض.
د) يقلل من فقد الماء من البيض ويمنع جفافه.
E) يوفر معظم العناصر الغذائية التي تستخدمها البيضة الملقحة.

14) من الأقدم إلى الأحدث ، يستمر التسلسل الإجمالي للتطور المبكر في أي من التسلسلات التالية؟
أ) أول انقسام للخلية ← يبدأ تخليق الحمض النووي للجنين ← تفاعل أكروسومال ← تفاعل قشري
ب) التفاعل القشري ← يبدأ تخليق الحمض النووي للجنين ← تفاعل أجزي ← الانقسام الأول للخلية
ج) رد فعل قشري ← تفاعل جسيم ← انقسام خلوي أول ← يبدأ تخليق الحمض النووي للجنين
د) أول انقسام للخلية ← يبدأ تخليق الحمض النووي للجنين ← تفاعل أكروسومال ← تفاعل قشري
هـ) رد فعل أكروسومال ← تفاعل قشري ← يبدأ تخليق الحمض النووي للجنين ← الانقسام الأول للخلية

15) يعمل التفاعل القشري مباشرة في
أ) تشكيل مظروف إخصاب.
ب) إنتاج كتلة سريعة لتعدد النطاف.
ج) إطلاق الإنزيمات المتحللة للماء من خلية الحيوانات المنوية.
د) توليد نبضة عصبية من خلية البويضة.
هـ) اندماج نوى البويضة والحيوانات المنوية.

16) في قنافذ البحر ، فإن & quotfast block & quot والكتلة الطويلة الأمد & quotslow & quot إلى polyspermy ، على التوالي ، هي
أ) تفاعل الأكروسومال وتشكيل بياض البيض.
ب) التفاعل القشري وتكوين بروتين الصفار.
ج) قشرة البيضة الهلامي والغشاء المحي.
د) إزالة الاستقطاب من الغشاء والتفاعل القشري.
ه) تعطيل الحيوانات المنوية الجسيمية.

17) في خلية بويضة معالجة بـ EDTA ، وهي مادة كيميائية تربط أيونات الكالسيوم والمغنيسيوم ، فإن
أ) سيتم حظر التفاعل الأخرسي.
ب) سيتم حظر اندماج نوى البويضة والحيوانات المنوية.
ج) لن يحدث منع سريع لتعدد النطاف.
د) لن يتم تشكيل مغلف التسميد.
ه) لا تحتوي الزيجوت على كروموسومات الأم والأب.

18) في الثدييات ، تكون النوى الناتجة عن اتحاد الحيوانات المنوية والبويضة أولًا ثنائية الصبغيات في نهاية الخلية.
أ) رد فعل جسيم.
ب) إتمام عملية تكوين الحيوانات المنوية.
ج) الانقسام الأولي.
د) تفعيل البويضة.
هـ) إتمام عملية المعدة.

19) تسميد طبيعي
أ) يعيد ثنائية الصبغيات.
ب) يتبع المعدة.
ج) مطلوب للتوالد العذري.
د) يدمج خليتين مزدوجتين في خلية أحادية العدد.
ه) يسبق الإباضة.


لوصف EDTA وأشكاله البروتونية المختلفة ، يستخدم الكيميائيون اختصارًا أكثر تعقيدًا ولكنه أكثر دقة يميز بين EDTA 4− ، القاعدة المترافقة التي هي الليجند ، و H4EDTA ، مقدمة هذا الترابط.

في كيمياء التنسيق ، ح4EDTA هو عضو في عائلة aminocarboxylate من الروابط التي تحتوي على حمض imidodiacetic ("H2IDA ") و nitrilotriacetic acid (" H.3NTA "). وتشمل الأقارب الأكثر تخصصًا N ، N'-ethylenediaminediacetic acid (" H.2EDDA ") و 1،2-ديامينوسيكلوهكسان- N ، N ، N '، N'-tetraacetic acid (" H4CyDTA ") هذه الروابط كلها مشتقة رسميًا من الأحماض الأمينية الجلايسين.

ح4تشكل EDTA مركبات تنسيق عالية الاستقرار قابلة للذوبان في الماء. في هذه المجمعات ، يكون اللاجند عادة إما سداسي أو خماسي ، EDTA 4− أو HEDTA 3− ، على التوالي. هذه المجمعات هي مراوان ، وقد تم حلها إلى متشكلات. [4]

في عام 1999 ، كان الاستهلاك السنوي من EDTA يعادل حوالي 35000 طن في أوروبا و 50000 طن في الولايات المتحدة. & # 91بحاجة لمصدر& # 93 أهم الاستخدامات:

  • التنظيف الصناعي: مركب أيونات Ca 2+ و Mg 2+ ، ملزمة للمعادن الثقيلة.
  • المنظفات: مركب Ca 2+ و Mg 2+ (تقليل عسر الماء).
  • التصوير الفوتوغرافي: استخدام Fe (III) EDTA كعامل مؤكسد.
  • صناعة اللب والورق: تعقيد المعادن الثقيلة أثناء التبييض الخالي من الكلور ، وتثبيت بيروكسيد الهيدروجين.
  • صناعة النسيج: معقدات المعادن الثقيلة ، عامل التبييض.
  • الكيماويات الزراعية: سماد الحديد والزنك والنحاس خاصة في التربة الجيرية.
  • الزراعة المائية: يستخدم الحديد- EDTA لإذابة الحديد في محاليل المغذيات.

الاستخدامات الأكثر تخصصًا لـ EDTA هي:

  • الغذاء: يضاف كمادة حافظة لمنع الأكسدة التحفيزية بواسطة الأيونات المعدنية أو المثبت ولإغناء الحديد. & # 91بحاجة لمصدر]
  • تمت الموافقة عليها من قبل إدارة الغذاء والدواء الأمريكية كمادة حافظة في الأطعمة المعبأة والفيتامينات وأغذية الأطفال.
  • العناية الشخصية: يضاف إلى مستحضرات التجميل لتحسين ثبات المنتج. & # 91بحاجة لمصدر]
  • إنتاج الزيت: يضاف إلى البئر لمنع ترسيب المعادن. & # 91بحاجة لمصدر]
  • صناعة الألبان والمشروبات: تنظيف بقع الحليب من الزجاجات. & # 91بحاجة لمصدر]
  • تنظيف غاز المداخن: إزالة NOx.
  • طب الأسنان كقناة جذر للري لإزالة الحطام العضوي وغير العضوي (طبقة اللطاخة).
  • المشروبات الغازية التي تحتوي على حمض الأسكوربيك وبنزوات الصوديوم ، للتخفيف من تكوين البنزين (مادة مسرطنة). & # 91بحاجة لمصدر]
  • إعادة التدوير: استعادة الرصاص من بطاريات الرصاص الحمضية المستعملة.
  • يستخدم EDTA في العلاج بالاستخلاب لفرط كالسيوم الدم الحاد والتسمم بالزئبق والتسمم بالرصاص [5].
  • بالاشتراك مع الكروم ، يستخدم EDTA لتقييم وظائف الكلى. يتم إعطاؤه عن طريق الوريد ومراقبة ترشيحه في البول. تعتبر هذه الطريقة المعيار الذهبي لتقييم معدل الترشيح الكبيبي ، والطريق الوحيد لـ Cr-EDTA للخروج من الجسم هو عن طريق الترشيح الكبيبي حيث لا يتم إفرازه أو استقلابه بأي طريقة أخرى.
  • يستخدم كمضاد للتخثر لعينات الدم
  • في طب العيون البيطري ، يمكن استخدام EDTA كمضاد للكولاجين لمنع تفاقم قرح القرنية في الحيوانات.
  • تشير بعض الدراسات المختبرية أيضًا إلى أن خلابة EDTA قد تمنع تجميع الصفائح الدموية ([أو اللويحات] التي يمكن أن تؤدي بخلاف ذلك إلى تكوين جلطات الدم ومنع تدفق الدم) على جدران الأوعية الدموية [مثل الشرايين]. هذه الأفكار نظرية ، مع ذلك. [3]

في علم المختبرات ، يستخدم EDTA أيضًا في:

  • كسح أيونات المعادن: في الكيمياء الحيوية والبيولوجيا الجزيئية ، يُستخدم استنفاد الأيونات بشكل شائع لتعطيل الإنزيمات التي تعتمد على المعادن والتي يمكن أن تلحق الضرر بالحمض النووي أو البروتينات
  • معايرة المقاييس المعقدة. .
  • تقدير عسر الماء.
  • يمكن استخدام EDTA كعامل إخفاء لإزالة أيون فلز من شأنه أن يتداخل مع تحليل أيون معدني ثانٍ موجود
  • مضاد للتخثر في الأجهزة الطبية والمخبرية.
  • مادة حافظة (عادة لتعزيز عمل مادة حافظة أخرى مثل كلوريد البنزالكونيوم أو الثيومرسال) في مستحضرات العين وقطرات العين. راجع "les Conservationurs in opthalmologie" الأطباء باتريس فو تان وإيف لاشكار ، مكتبة الطب في ثيا.
  • معاير يستخدم لتحديد تركيز النيكل في حمام طلاء النيكل عديم الكهرباء.
  • في علم المعادن لإزالة البقع الناتجة عن المؤثرات. تتم إزالة أكاسيد المعادن عن طريق المسح بلطف بـ EDTA والشطف بالماء.
  • في مزارع الخلايا ، يتم استخدام EDTA كعامل مخلب يرتبط بالكالسيوم ويمنع انضمام الكادرينات بين الخلايا ، مما يمنع تكتل الخلايا. (غالبًا ما تستخدم في التحكم في زراعة الخلايا).

مثبطات (تنافسية وغير تنافسية)

الإنزيم هو الجهاز الهضمي لتحطيم الجزيئات الكبيرة إلى صغيرة بحيث يمكن للخلية استخدامها. تعتبر مثبطات الإنزيم مهمة للغاية خاصة في الطب لمنع الجزيئات من المعالجة وخلق مظاهر سريرية سيئة مثل الحساسية على سبيل المثال

إجابة:

تتنافس المثبطات التنافسية مع الرابط الفعلي لموقع الارتباط في البروتين بينما لا تفعله المثبطات غير التنافسية.

تفسير:

مثبطات
هي مادة تقلل أو تقلل من نشاط الإنزيم. يمنع الأداء السليم للإنزيم.

مثبطات تنافسية
مثبطات تنافسية هي تلك التي تحاكي شكل الركيزة الفعلية وترتبط بالموقع النشط.

يوضح الشكل أدناه الأداء ، وتأتي الركيزة وترتبط بالإنزيم الذي يخضع لتكوين المنتج ويطلق الموقع ، مما يجعله متاحًا للركيزة الجديدة لتأتي وترتبط.

عند وجود مثبط تنافسي يحاكي الركيزة ويرتبط بالإنزيم ولكن لا يتم تحويله إلى أي منتج ويتنافس على موقع الإنزيم النشط مع الركيزة الفعلية.


بعبارات بسيطة ، ينخفض ​​نشاط الإنزيمات في وجود المثبط التنافسي

في الشكل أدناه ، تكون حركية الإنزيم منخفضة عند التركيز المنخفض للركيزة ولكن مع زيادة كمية الركيزة ، فإن نشاطها يعود أيضًا إلى طبيعته

مثبطات غير تنافسية
لا تتنافس المثبطات غير التنافسية على الموقع النشط مع الركيزة ولكنها لا تسمح للركيزة بالارتباط في الموقع النشط.

هذه في الواقع من نوعين
1. Allosteric كما هو موضح في الشكل الأول أدناه ، ترتبط في موضع مختلف ولكنها تسبب في الواقع تغييرًا في الموقع النشط بحيث لا يمكن ربط الركيزة الجديدة.
2. في الشكل الثاني أدناه ، يتم إعاقة الركيزة بشكل معقّم ، مما يؤدي إلى حجب الموقع النشط بحيث لا يمكن أن تتفاعل الركيزة مع الإنزيم.


شكل 1

الشكل 2 (آسف لم أجد أي دقة أفضل)

بعبارات بسيطة لا تسمح المثبطات غير التنافسية للركيزة بالالتصاق في الموقع النشط.

في الشكل أدناه ، يكون نشاط الإنزيم منخفضًا عند التركيز المنخفض للركيزة ولكن مع زيادة كمية الركيزة ، لا يمكن أن يصل نشاطها إلى المستوى الطبيعي على عكس المانع التنافسي.


عمل EDTA - علم الأحياء

EDTA - جزيء ذو قصة معقدة

سكوت أ
كلية مجتمع الأمير جورج

جزيء الشهر مارس 2004

ما هو القاسم المشترك بين البيرة والصلصة الخاصة على ماكدونالدز بيج ماك والشامبو الأزرق مثل الألوة فيرا أو ريفلون أكوامارين؟

EDTA أو هالثيليندإامينرإتراأحمض الخليك هو جزيء جديد لتركيب أيونات المعادن. وهو حمض متعدد البروتيك يحتوي على أربع مجموعات حمض الكربوكسيل (الهيدروجين الحمضي أحمر) ومجموعتين أمين مع إلكترونات زوج وحيد (نقاط خضراء). الصيغة الهيكلية الكلاسيكية معطاة أدناه. يتم تصنيع EDTA على نطاق صناعي من إيثيلين ديامين ، فورمالديهايد ، ومصدر للسيانيد (HCN أو NaCN). انقر هنا لفتح التفاعلات الصناعية في نافذة جديدة. يتم إنتاج أكثر من 100،000 طن متري سنويًا على مستوى العالم.

إلى جانب هيدروجين المجموعة الكربوكسيلية الأربعة ، يمكن لـ EDTA إضافة اثنين من الهيدروجين إلى مجموعات الأمين. فيما يلي تراكيب الشكل البروتوني بالكامل (على اليسار) ، والشكل النموذجي الموجود في العديد من الكتب المدرسية (المركز ، المطابق للهيكل ثنائي الأبعاد أعلاه) ، والشكل المنزوع بالكامل (تمت إزالة كل حمض H الحمضي) (على اليمين).

تتمثل الخاصية غير العادية لـ EDTA في قدرتها على تخليب أو تعقيد أيونات المعادن في مجمعات 1: 1 من معدن إلى EDTA. يرتبط الشكل المنزع بالكامل (كل الهيدروجين الحمضي المزال) من EDTA بالأيون المعدني. ثوابت التوازن أو التكوين لمعظم المعادن ، وخاصة المعادن الانتقالية ، كبيرة جدًا ، ومن ثم يتم تحويل التفاعلات إلى المعقد. تعتمد العديد من التفاعلات على الأس الهيدروجيني ، خاصةً معقدات التكوين الأضعف مع Ca +2 أو Mg +2.

M + n + Y -4 MY n-4 KF = (MY n-4) / (M + n) (Y -4)

يمكن إجراء تحليل المعادن عن طريق المعايرة باستخدام EDTA واستخدام مؤشر أيون معدني. تم تنفيذ العمل الرائد مع EDTA بواسطة Gerold Schwarzenbach في الأربعينيات من القرن الماضي. الكاشف المشترك لصنع حلول EDTA هو Na2ح2ص . 2 ح2O. انقر هنا للحصول على قائمة ثابت التشكيل (K.F) القيم. قيم K.F تزداد مع شحنة أيون المعدن ومع تناقص نصف القطر الأيوني مع الشحن المستمر. يتم تحديد عسر الماء ، في الغالب من Ca المذابة +2 و Mg +2 ، بواسطة معايرة EDTA عند الرقم الهيدروجيني = 10 - انقر هنا لتجربة نموذجية.

يظهر أدناه هيكل المركب الكلاسيكي لـ Fe +3 مع EDTA. هذا هو EDTA الذي يعمل كرابطة سداسية أو جميع المواقع الستة الموجودة على ETDA مرتبطة بأيون المعدن. كيف تصف هندسة ثماني السطوح Fe +3 في المجمع؟

التنسيق ثماني السطوح لـ Fe-EDTA (يسار) والعديد من المجمعات الأخرى متوترة للغاية. تُظهر نسخة ملء الفراغ للهيكل (على اليمين) كيف يظهر الهيكل مزدحمًا. ضع في اعتبارك بنية Cr +3 مع EDTA الموضح أدناه. ما هو الاختلاف بين مركب Cr-EDTA مقارنة بمركب Fe-EDTA؟

تم الإبلاغ عن عدد من معقدات EDTA التي تعمل على EDTA كرابطة خماسية (خمسة مواقع فقط على رابط EDTA ، مجموعة كربوكسيلية واحدة لا). يوجد جزيء ماء أو ليجند آخر في الموقع السادس ، لذلك لا تزال المجمعات ثماني السطوح في الهندسة.

لذلك دعونا نفحص تكوين المجمع. تم إنتاج الرسوم المتحركة أدناه في Spartan '04 عن طريق وضع Fe +3 (أخضر) بجوار EDTA مع إزالة H الحمضية (تم نزعها بالكامل كـ Y -4) ثم تقليل الطاقة. لاحظ أن EDTA تشكل خمسة روابط فقط مع Fe +3 ، حيث أن الأشكال المعقدة (الصورة المركزية معقدة في نهاية الرسوم المتحركة). تحتوي الصورة على اليمين على جزيء ماء مضاف ، بالإضافة إلى أن EDTA قد التقطت أيون هيدروجين على مجموعة حمض الكربوكسيل غير المرتبطة بالحديد ، وتم تقليل الطاقة إلى الحد الأدنى لتشكيل مجمع الإحداثيات الستة.

نظرًا لقدرته القوية على التعقيد لمعظم أيونات المعادن ، يتم استخدامه في صناعة المواد الغذائية كعامل عزل. قد يمنع تعقيد أيون الفلز تفاعلات أخرى ، مثل معادن الربط التي تعتبر عوامل مساعدة للإنزيمات ، أو مجرد إزالة طعم معدني ، مثل التلوث المعدني المضاف أثناء المعالجة. راجع موقع Dow Chemical حول استخدام منتجهم التجاري - Versene. يتم إعطاء بعض الأمثلة النموذجية أدناه.

أظهرت الدراسات الحديثة أن NaFeEDTA و Na2أدت إضافة EDTA إلى مركبات إغناء الحديد النموذجية في الحبوب إلى زيادة امتصاص الحديد لدى البشر البالغين.

تسمح هذه الخاصية نفسها باستخدام EDTA في حوادث التسمم بالرصاص من قبل مهنة الطب. ثابت التكوين لمركب Pb-EDTA هو 10 18. الحقن في الوريد من الصوديوم2يتم إعطاء محلول CaEDTA عند 25 مجم / كجم من كتلة الجسم / يوم على مدى 6 ساعات لمدة 5 أيام عندما تزيد مستويات الرصاص في الدم عن 45 ملي جم / ديسيلتر. يحل أيون Pb +2 محل أيون Ca +2 في المجمع لأن ثابت التكوين لمركب الرصاص أكبر من معقد الكالسيوم.

Pb +2 + CaY -2 PbY -2 + Ca +2 K

يوجد حد الخمسة أيام لمنع استنفاد Zn +2 ، لأن Zn +2 أيون يحل محل Ca +2 أيون في المجمع أيضًا. يضاف EDTA إلى الدم المخزن في بنوك الدم كمضاد للتخثر لربط Ca +2 أيون. الاستخدامات الأخرى التي تم الإبلاغ عنها لـ EDTA في الطب ليس لها أساس سريري مثبت. انقر هنا للمزيد من المعلومات.

من الاستخدامات الرئيسية الأخرى لـ EDTA هو المنظفات لتكون بمثابة عامل بناء (معادن مخلبة) خاصة كبديل للفوسفات ، وهو عنصر غذائي رئيسي في مياه الصرف الصحي. ومع ذلك ، فإن مشكلة EDTA هي عدم قدرتها على التحلل البيولوجي في البيئة. يوجد EDTA في العديد من المياه الطبيعية ويحدث عند مستويات أعلى في مياه الصرف الصحي السائلة. حظرت دول أوروبا الغربية استخدام EDTA في المنظفات. للحصول على مناقشة كاملة للعوامل المخلبية في البيئة - انقر هنا. EDDS (S، S'-هالثيليندإاميندأناسحمض uccinic) ، وهو أيزومر هيكلي لـ EDTA ، كبديل قابل للتحلل. EDDS هو عامل معقد جيد ويتم تقسيمه أثناء عمليات معالجة مياه الصرف الصحي. هذه مساهمة في الكيمياء الخضراء من خلال إجراء تغيير هيكلي طفيف. تجاوز الإنتاج التراكمي لـ EDDS بواسطة شركة Innospec Inc. (المعروفة سابقًا باسم Octel) 10000 طن متري في عام 2002.

تتم إضافة EDTA إلى العديد من أنواع البيرة التجارية لتثبيت الرغوة ، والاستفادة من خصائص المواد الخافضة للتوتر السطحي لـ EDTA ، واستخدامها لإزالة القشور عن طريق تعقيد الكالسيوم من كربونات الكالسيوم التي تتشكل على معدات المعالجة.

يستخدم اللون الأزرق لمركب Cu-EDTA في العديد من أنواع الشامبو. راجع استخدام إدارة الأغذية والعقاقير (EDTA) في مستحضرات التجميل.

حمض إيثيلين أمينيتترا أسيتيك وعوامل مخلبية ذات صلة في موسوعة أولمان للكيمياء الصناعية المجلد. أ 10

ما هذه الأشياء: المواد الحافظة ، سي & أمبير11 نوفمبر 2002 http://pubs.acs.org/cen/science/8045/8045sci2.html

جوائز المملكة المتحدة للتكنولوجيا الكيميائية الخضراء لأداء المواد الكيميائية لأوكتل
http://www.chemsoc.org/pdf/gcn/Octel_Award.pdf

EDTA: العامل الخالب تحت الفحص البيئي http://www.scielo.br/pdf/qn/v26n6/a20v26n6.pdf

تقييم مركبات EDTA لإغناء الحديد للأغذية القائمة على الحبوب
Br. نوتر. 84 (6), 903-910 (2000)

ملوثات مياه الشرب الكيميائية الناشئة في تحديد ملوثات مياه الشرب المستقبلية http://www.nap.edu/books/0309064325/html/112.html

الكيمياء الحيوية للعوامل المخلبية, حرره B. Nowack و J. VanBriesen ، ACS Symposium Series Vol. 910 ، 2005 http://www.ito.ethz.ch/SoilProt/staff/nowack/book_toc.html

للمتعة فقط: شاهد أغنية EDTA - انقر هنا.

نرحب بالملاحظات - انقر فوق صندوق البريد. 1 مارس 2004
تمت المراجعة في 1 أغسطس 2007


أنواع البورفيرينات

البورفيرينات في الحيوانات

من الاستخدامات الرئيسية لجزيئات البورفيرين في الحيوانات بناء الهيم مجموعات. هذه الجزيئات هي ببساطة جزيء بورفيرين بسلاسل جانبية مختلفة مستبدلة حول الحلقة الرئيسية. في الهيم ، تؤدي حلقة البورفيرين وظيفة مهمة. جزيئات النيتروجين في مركز الحلقة قادرة على "استضافة" جزيء الحديد. إنه هيكل البورفيرين ، الذي يحتفظ بالحديد ، الذي يعطي الدم لونه الأحمر. في حين أن النيتروجين لا يرتبط تقنيًا بجزيء الحديد ، إلا أنه يظل ثابتًا في مكانه بتأثير جزيئات النيتروجين وتوزيعها في الفضاء. يمكن رؤية الهيم العام أدناه.

الغرض العام من الهيم هو نقل الأكسجين. هذا يمكن رؤيته في الصورة أعلاه. عندما يرتبط الأكسجين بالهيم ، يمكن نقله بسرعة في جميع أنحاء الجسم وعبر الخلايا. يوجد بروتين معين مرتبط بكل جزء من أجزاء الجسم والذي يستخدم الهيمز لنقل الأكسجين. تحتوي خلايا الدم الحمراء على البروتين الهيموغلوبين، الذي يبقي الهيم في مكانه. تنقل هذه البروتينات أيضًا وظائف الهيم. عندما يكون الهيموغلوبين في بيئة حمضية ، على سبيل المثال ، فإنه يغير شكله. هذا التغيير في الشكل يجبر الأكسجين على الانفصال عن الهيم. تطورت هذه الآلية لأن ثاني أكسيد الكربون يجعل الدم حمضيًا ، وهو منتج ثانوي لاستخدام الأكسجين. لذلك ، عندما يكون ثاني أكسيد الكربون مرتفعًا ، تحتاج الخلايا إلى المزيد من الأكسجين. تسمح آلية الهيموجلوبين هذه بإطلاق الأكسجين في الأجزاء الصحيحة من الجسم.

جزيء البورفيرين هو جزيء عضوي ، ويجب تكوينه وتدميره بواسطة بروتينات معينة في الجسم. نظرًا لأن البروتينات مبرمجة بواسطة الحمض النووي ، فإن أي طفرات في الحمض النووي يمكن أن تسبب خللًا في البروتين الذي يعالج جزيئات البورفيرين. على الرغم من كونه مفيدًا للغاية في العادة ، إلا أن البورفيرين الذي لم يتشكل بشكل صحيح أو لا يمكن تكسيره يشكل تهديدًا خطيرًا على الجسم. جزيئات البورفيرين شديدة التفاعل. يمكن أن تعطل غشاء الخلية ، ولأنها تحتوي على جزيء من الحديد لديه القدرة على العمل كمغسلة للإلكترون ، فإنها تشجع على تكوين الشوارد الحرة.

تسمى الحالة الوراثية التي تسبب تراكم البورفيرينات بسبب عدم قدرتها على التكسير أو تكوينها بشكل صحيح البورفيريا. هناك أنواع عديدة من البورفيريا ، بناءً على تحور الإنزيم. لهذا السبب ، هناك مجموعة متنوعة من الأعراض والعلاجات للإصدارات المختلفة. في النهاية ، يجب تحديد جزيء البورفيرين الذي يسبب المشكلة والتعامل معه. قد يعني هذا استبدال البورفيرين الاصطناعي ، أو إدخال المريض في العلاج العلاج الجيني لجعل أجسامهم تنتج الإنزيمات المناسبة. غالبًا ما يتم تشخيص البورفيريا عن طريق البول الأرجواني اللون ، الذي يسببه البورفيرين غير المنكسر المتبقي في البول.

البورفيرينات في النباتات

نظرًا لأن جزيئات البورفيرين محفوظة من الناحية التطورية ، فإننا نرى بورفيرينات الهيم الحاملة للحديد في النباتات كما هو الحال في الحيوانات. تستخدم النباتات أيضًا سلسلة نقل الإلكترون لإنتاج ATP ، وتستخدم البورفيرينات المماثلة لتلك الموجودة في الحيوانات.

However, plants have also mastered a different configuration of porphyrin molecule, which allows them to capture the energy in sunlight. الكلوروفيل is a special molecule designed around a porphyrin base. Seen below, the chlorophyll molecule has several unique side-chains off of the porphyrin molecule. It also has a really long side chain, seen coming off the bottom. These side-chains slightly change the shape and configuration of the base porphyrin.

You will notice that instead of iron (Fe), there is now a magnesium (Mg) ion “captured” within the porphyrin. Unlike heme groups, which contain iron, the magnesium in the chlorophyll is not capable of transferring oxygen. Instead, the molecule functions to capture energy from sunlight. The magnesium ion helps capture and store electrons during the process. The magnesium ion also helps the porphyrin absorb red and blue light, instead of reflecting red light as it does with blood. This causes only a strong green color to come through, which gives plants their green color.

Other Porphyrins

Beyond plants and animals, there are porphyrins almost everywhere in the world. Bacteria use porphyrins in a similar way to animal cells, although the final molecules they use may look very different from the hemes in animals. Certain bacteria also have the ability to photosynthesize, and like plants, they use porphyrins to capture the energy of the sun. There are also substances like فيتامين ب 12, which are synthesize from a porphyrin to start, but hardly resemble one when complete.

Porphyrins can also be synthesized in the laboratory. These molecules, because they act as pigments, have been used in dyes and as color in various solutions. While we can synthesize many porphyrins in the lab, they tend to be more symmetrical than natural porphyrins. This is because our body uses enzymes developed over millennia to shape porphyrins into a useful shape. Our understanding of biochemistry is not yet advanced enough to replicate these processes in the lab.

Another interesting example of porphyrins can be found in crude oil. Apparently, during the many centuries buried under the Earth, organic molecules can naturally form into porphyrins. These substances are found as side-products when crude oil is extracted from the ground. Evolutionary scientists have hypothesized that these porphyrins, and those created in similar methods, could have been the starting material with which life on Earth first developed.

1. There are currently 9 recognized types of Porphyria. Which of the following statements accurately describes the reason for this?
أ. The genes encoding for porphyrin-changing enzymes can mutate in many ways
ب. The different types of Porphyria simply represent different symptoms for the same disease
ج. The 9 types are all caused by the same gene

2. Plants, animals, and bacteria all use a version of the Cytochrome protein, which houses a heme based around a porphyrin. What does this tell us about evolution?
أ. لا شيئ
ب. These organisms have a common ancestor
ج. These organisms have no common ancestors

3. Porphin, the base molecule of a porphyrin, is not found in nature. لماذا هذا؟
أ. Porphin can only be created in the laboratory
ب. Porphin is an intermediate cells immediately attach functional side-chains
ج. Porphin is only created by extremely rare organisms


شاهد الفيديو: طريقة سهلة لتحضير أنابيب الإديتا EDTA في المعمل!!! (يوليو 2022).


تعليقات:

  1. Pierrel

    بالتاكيد! لا تروي القصص!

  2. Ane

    أنا أفهم هذا السؤال. جاهز للمساعدة.

  3. Safwan

    أعتقد أنك كنت مخطئا. أنا متأكد. دعونا نحاول مناقشة هذا.

  4. Julabar

    إذا نظرت عن كثب ، يمكنك العثور على بعض النقاط المثيرة للاهتمام هنا ...

  5. Tlexictli

    ما يدور في ذهنك

  6. Ignace

    برافو ، فكرة جيدة



اكتب رسالة