معلومة

لماذا يحتاج Electroporator إلى كوفيت؟

لماذا يحتاج Electroporator إلى كوفيت؟


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

لم أحصل مطلقًا على جهاز Electroporator لمختبري المنزلي. نظرًا لأنها باهظة الثمن ، أحاول إنشاء نسخة رخيصة لنفسي. في جميع التصميمات التجارية ، أرى أننا بحاجة إلى وضع العينة في كفيت من 0.1 سم إلى 0.2 سم للقيام بعملية التثقيب الكهربائي ، هل يمكنني فقط استبدالها بأنبوب بلاستيكي إيبندورف ووضع قطبي من الألومنيوم 0.1-> 0.2 سم بالداخل؟


بشكل عام ، أنصح بعدم صنع جهاز كهربائي منزلي: الجهد المطلوب للتثقيب الكهربائي مرتفع جدًا ، حتى مع المعدات الاحترافية ، يمكنك بسهولة الحصول على صاعقة القوس. في جهاز مصنوع ذاتيًا من شأنه أن يشكل خطر حريق خطير.

ولكن حتى من الناحية النظرية ، هناك مشاكل في التصميم الذي تقترحه:

1) من المهم أن تتعرض جميع الخلايا البكتيرية في الكوفيت إلى مجال كهربائي ناتج عن ارتفاع الجهد العالي. إذا كنت تستخدم أقطابًا كهربائية بسيطة ، فلن تؤثر إلا على الخلايا القليلة الموجودة بينها مباشرةً ، مما سيقلل بشكل كبير من كفاءة التثقيب الكهربائي. لكي يعمل التصميم الخاص بك بشكل صحيح ، ستحتاج إلى أقطاب كهربائية بالضبط قم بمطابقة أبعاد أنبوب إيبندورف للتأكد من ضغط جميع البكتيريا بينها.

2) باستخدام جهازك ، يمكنك إجراء عملية كهربية واحدة فقط ، ثم يتعين عليك تنظيف الأقطاب الكهربائية تمامًا. يجب القيام بذلك لسببين: أولاً ، لا تريد نقل أي بكتيريا (أو كما أشار كريس الحمض النووي) من دفعة إلى أخرى. ثانيًا ، يجب أن تكون الأقطاب الكهربائية نظيفة من أي أملاح (أو جزيئات أخرى تزيد من التوصيل في المحلول) لمنع صاعقة القوس بينهما.


ElectroPen: جهاز كهربائي محمول ومنخفض التكلفة وخالي من الكهرباء

مدرسة الانتساب للهندسة الكيميائية والجزيئية الحيوية ، معهد جورجيا للتكنولوجيا ، أتلانتا ، جورجيا ، الولايات المتحدة الأمريكية ، مدرسة لامبرت الثانوية ، سواني ، جورجيا ، الولايات المتحدة الأمريكية

مدرسة الانتساب للهندسة الكيميائية والجزيئية الحيوية ، معهد جورجيا للتكنولوجيا ، أتلانتا ، جورجيا ، الولايات المتحدة الأمريكية

مدرسة الانتساب للهندسة الكيميائية والجزيئية الحيوية ، معهد جورجيا للتكنولوجيا ، أتلانتا ، جورجيا ، الولايات المتحدة الأمريكية

مدرسة الانتساب للهندسة الكيميائية والجزيئية الحيوية ، معهد جورجيا للتكنولوجيا ، أتلانتا ، جورجيا ، الولايات المتحدة الأمريكية

الانتماء إلى مدرسة لامبرت الثانوية ، سواني ، جورجيا ، الولايات المتحدة الأمريكية

مدرسة الانتساب للهندسة الكيميائية والجزيئية الحيوية ، معهد جورجيا للتكنولوجيا ، أتلانتا ، جورجيا ، الولايات المتحدة الأمريكية


ملخص

يعد وضع العلامات على جزيئات معينة والتحكم الاصطناعي فيها في الخلايا الحية تقنيات قوية للتحقيق في الديناميات الجزيئية داخل الخلايا. لاستخدام هذه التقنيات ، يجب تحميل المركبات الجزيئية (المشار إليها فيما يلي ببساطة باسم "العينات") في الخلايا. تُستغل تقنيات التثقيب الكهربائي لتحميل عينات من الغشاء الخالي من الغشاء في الخلايا. هنا ، قمنا بتطوير جهاز كهربائي جديد بأربع خصائص خاصة. (1) يتم تطبيق نبضات كهربائية على الخلايا الملتصقة مباشرة ، دون إزالتها من الطبقة التحتية. (2) يمكن تحميل العينات في الخلايا الملتصقة أثناء مراقبتها على مرحلة المجهر المقلوب. (3) يكفي فقط 2 ميكرولتر من محلول العينة. (4) الجهاز سهل الاستخدام للغاية ، حيث يتم التعامل مع الكوفيت ، المتصل بطرف ماصة تلقائية متوفرة تجاريًا ، يدويًا. باستخدام أجهزتنا ، قمنا بتحميل مسبار فلوري من خيوط الأكتين ، Alexa Fluor 546 phalloidin ، في الخلايا القرنية المهاجرة. يمكن تعديل مستوى هذا المسبار في الخلايا بسهولة عن طريق تغيير تركيزه في وسط التثقيب الكهربائي. يمكن تحميل العينات في الخلايا القرنية وخلايا HL-60 الشبيهة بالعدلات و ديكتيوستيليوم الخلايا على ساترة ، والخلايا القرنية على طبقة سفلية مرنة من السيليكون. يجب أن يكون الجهاز الجديد مفيدًا لمجموعة واسعة من الخلايا الملتصقة ويسمح بالتثقيب الكهربائي للخلايا على أنواع مختلفة من الطبقات التحتية.


الكوفيتات electroporation- استخدام واحد فقط؟ - (23 سبتمبر 2006)

أهلا،
هل يمكن استخدام كوفيتات electroporation مرة واحدة فقط حقًا؟
أعني هل تعتقد أنه يمكنني استخدامها مرارًا وتكرارًا لتحويل نفس الخط البكتيري بنفس الحمض النووي؟

يقولون أنه يستخدم لمرة واحدة فقط ولكني أعتقد أنه يمكن استخدامه مرة أخرى إذا كان نفس الحمض النووي ونفس الخط البكتيري.
قال المدير التنفيذي للتسويق الذي جاء لإثبات جهاز Electroporator إذا كان القيام بنفس الحمض النووي والخط البكتيري ، يمكن استخدام نفس الكوفيت مرة أخرى للتثقيب الكهربائي في نفس اليوم.
حسن الحظ. حاول وج

في الواقع ، يمكن استخدام تلك الأكواخ ذات الاستخدام الفردي مرارًا وتكرارًا.

حتى يتشقق من سوء الاستخدام والتعامل القاسي.

بعد استخدام الكوفيت ، قم برميها ببساطة في دورق من مادة Trigen المخفف (منظف غير أيوني)

بمجرد امتلاء الدورق ، اشطف الكوفيت بصرامة 5 مرات على الأقل تحت ماء الصنبور الجاري ، متبوعًا بما لا يقل عن 4 مرات بالماء المقطر. نقع في ماء مقطر ساخن جدا لمدة 15 دقيقة (اختياري). ثم رج بقوة مع 70٪ EtOH لمدة 20 دقيقة (نستخدم شاكر للقيام بالرج). استبدل المحلول بـ 70٪ EtOH طازج ، قم برجه أكثر (20 دقيقة). افعل هذا لدورة ثالثة أخيرة. ثم قم بتصفية EtOH ، وقم بتغطيته واتركه على المقعد لبضعة أيام حتى يتبخر EtOH.

اعتدنا على استخدام الكوفيت حتى تصدع.

كنا نغسلها ونرمي الكوفيت في دورق يحتوي على 70٪ من الإيثانول. ثم نغسله بقوة بالماء لبضع مرات ثم نغسله أخيرًا في الماء المقطر ثم نجفف مرة أخرى.

نحن نتبع إلى حد كبير نفس ما هو مذكور أعلاه في مختبرنا ، إلا أننا نعرض الأكواخ للأشعة فوق البنفسجية (حوالي 5 دقائق) أيضًا.

حسنًا هنا بسيط حقًا ، إنهم يغسلون بالإيثانول ثلاث مرات ويعيدون استخدامه مباشرة. نظرًا لأن الجميع هنا مقتنعون بتحقيق نتائج رائعة ، فأنا أواصل الإبلاغ عن التلوث. أتساءل عما إذا كانت من الصناديق ، ولكن لدينا فقط 5 أكواب في المختبر يتم إعادة استخدامها باستمرار لسنوات عديدة ، لذا يمكنني تجربة أجهزة جديدة للتحقق منها مرة أخرى ، والطلب منها أمر غير وارد بشكل واضح. على أي حال ، بدأت أشك في أن الآخرين يعانون أيضًا من التلوث ولكن لا يبلغوني ..

التلوث .. يا عزيزي. يحدث ذلك مع إعادة استخدام الكوفيت ولكنه عادة ما يكون صغيرًا جدًا.

يمكن أن تكون الكوفيت رخيصة نوعًا ما إذا كنت تتسوق. لست متأكدًا من تكلفتها في اليابان ، ولكن في المملكة المتحدة ، يمكن أن يختلف السعر من 11 جنيهًا إسترلينيًا لكل كوفيت وصولاً إلى 1 جنيه استرليني. تبدو جميع الصناديق متشابهة تمامًا ، وتعمل بنفس الطريقة. لديهم حتى نفس الترميز اللوني. أعتقد أنه نفس المنتج بسعر مختلف فقط ليصطاد الناس وينزف & # 39em جاف.

لذلك ربما تكون فكرة أن تتسوق. تميل الشركات الصغيرة (على الأقل هنا) إلى أن تكون أقل عطشًا للدماء مع أسعارها وأكثر ودية / سريعة مع خدماتها.

اعتدنا الحصول عليها مقابل 1-2 يورو للقطعة. يمكنك محاولة الحصول على بضع قطع لتجربتها.

لقد قمت دائمًا بإعادة استخدام الكوفيتات الكهربية ، وأعد استخدامها. يكفي ماء مليق و 70٪ إيثانول كغسيل. عادةً ما أقوم أولاً بالرش بالماء ، ثم بالإيثانول ، ثم مرة أخرى بالماء ، وجافًا واحتفظ به للجولة التالية.

أنا أحب viv ، وكل شهرين ، أضع جميع الأوعية في حمام 0.5N هيدروكسيد الصوديوم لمدة ساعة واحدة إلى ليلة وضحاها وأغسلها بالماء.
لا تلوث حتى الآن.
أرميهم بعيدًا عندما يحدث القوس الكهربائي مرتين بنفس الكوفيت.


تذييل

معلومة

آخر

Avantor & reg ، إحدى شركات Fortune 500 ، هي مزود عالمي رائد للمنتجات والخدمات ذات المهام الحرجة للعملاء في مجال الأدوية الحيوية والرعاية الصحية والتعليم والحكومة والتقنيات المتقدمة وصناعات المواد التطبيقية. تُستخدم محفظتنا في كل مرحلة تقريبًا من مراحل أنشطة البحث والتطوير والإنتاج الأكثر أهمية في الصناعات التي نخدمها. تأتي إحدى أعظم نقاط قوتنا من امتلاك بنية تحتية عالمية ذات موقع استراتيجي لدعم احتياجات عملائنا. تمكننا بصمتنا العالمية من خدمة أكثر من 225000 موقع للعملاء وتمنحنا وصولاً مكثفًا إلى مختبرات البحث والعلماء في أكثر من 180 دولة. نضع العلم في حركة لخلق عالم أفضل. للحصول على معلومات ، قم بزيارة www.avantorsciences.com وتجدنا على LinkedIn و Twitter و Facebook.

& نسخ 2021 VWR International، LLC. كل الحقوق محفوظة.
& نسخ 2021 FORTUNE Media IP Limited جميع الحقوق محفوظة. مستخدمة بموجب ترخيص.

لا يدعم موقع الويب هذا إصدار Internet Explorer الخاص بك. نوصيك بالترقية إلى Internet Explorer 11 أو مستعرض آخر مدعوم ، والتحقق لمعرفة ما إذا كنت تستخدم IE11 في وضع عرض التوافق.


العملية

يتم عمل Electroporation مع المولدات الكهربائية، الأجهزة التي تولد التيار الكهربائي وترسله من خلال محلول الخلية (البكتيريا عادةً ، لكن أنواع الخلايا الأخرى تستخدم أحيانًا ، كما تمت مناقشته أعلاه). يتم ضخ المحلول في أنبوب زجاجي أو بلاستيكي يحتوي على قطبين من الألومنيوم على جانبيها.

على سبيل المثال ، بالنسبة للتثقيب الكهربائي البكتيري ، عادةً ما يتم استخدام معلق يبلغ حوالي 50 ميكرولتر. قبل التثقيب الكهربائي يتم مزجه مع البلازميد ليتم تحويله. يتم ضخ الخليط في الكوفيت ، ويتم ضبط الجهد الكهربائي على المحرك الكهربائي (غالبًا ما يتم استخدام 240 فولت) ويتم إدخال الكوفيت في المكهرب. مباشرة بعد التثقيب الكهربائي يضاف 1 مليلتر من الوسط السائل إلى البكتيريا (في الكوفيت أو في أنبوب إبندورف) ، ويتم تحضين الأنبوب عند درجة حرارة البكتيريا المثلى لمدة ساعة أو أكثر ثم ينتشر على صفيحة أجار.

نجاح الكهرباء يعتمد بشكل كبير على نقاء محلول البلازميد ، وخاصة على محتواه من الملح. قد تتسبب المحاليل غير النقية في حدوث انفجار صغير (يُعرف باسم الانحناء) ، وفي هذه الحالة تكون البكتيريا ميتة وتحتاج العملية إلى إعادة بنائها. إذا حدث هذا في كثير من الأحيان ، يمكن إجراء ترسيب إضافي قبل التثقيب الكهربائي.


لماذا يحتاج Electroporator إلى كوفيت؟ - مادة الاحياء

عرض فجوة الكوفيت الذي أستخدمه هو 0.4 سم. هل يمكنني استخدام هذا الكوفيت للخلايا الفطرية والبكتيرية؟

هل يمكن لأي شخص أن يعطيني بروتوكول استخدام هذا الكوفيت مع electropulser electropulser bio-rad؟

تُستخدم cuvvettes بعرض فجوة 0.4 سم لخلايا الثدييات أو التثقيب الكهربائي لخلايا ES وفقًا لتوصية bio-rad.

هل عملت معك

كفيت بحجم 0.4 سم يعمل مع الإشريكية القولونية.

مرحبًا Winschau ، أنا مهتم بكفاءة التحويل عندما تم استخدام كوفيت 0.4 سم ل E. Coli. شكرا لك! اريد ان اجربها ايضا

ما هي المجلة المناسبة لنشر عامل التأثير المنخفض ISI لنمذجة البروتين / المعلوماتية الحيوية / علم الأحياء البنيوي؟

أريد أن أنشر مخطوطة تتعلق بنمذجة البروتين مع عامل التأثير المنخفض ، مفهرسة بواسطة ISI ، scopus ..

كيف يمكنني توقع وتقييم ملف تعريف DOPE هذا؟

هل يمكن لأي شخص إبداء تعليقات على ملف تعريف DOPE هذا؟ شكرا لك.

كيف يتم تنزيل هذا المقال؟ شكرا.

المواد المتطايرة الأزهار من التخليق الحيوي إلى الوظيفة

مرحبًا ، ما هو خادم النمذجة المناسب لحجم متواليات الأحماض الأمينية ، والتي تتراوح من 300 إلى 450 من مخلفات الأحماض الأمينية؟

أنا مستخدم مبتدئ لاستخدام أدوات المعلومات الحيوية البروتينية. لا أعرف المسار الواضح لتحليل تسلسلات الأحماض الأمينية التي تهمني لنمذجة بنية ثلاثية الأبعاد. ما هي الخطوة الأولى من.

كيف يمكن للمرء استخدام TSP-PRED بشكل صحيح لتقديم تسلسلات البروتين؟
كيف يتم فتح Geno3D؟
كيفية التغيير إلى ملف .ali وملف .py؟

كانت ملفاتي الحالية للموديل 9.14 (Mod9.14) كلها في مفكرة ، باستثناء تسلسلات البروتين بتنسيق pdb. لا أعرف كيفية تغيير ملفاتي إلى تنسيق .ali و .py. أي اقتراح؟

هل يمكن لأي شخص تقديم المشورة بشأن البروتين المنقى الخاص به في محلول شطف يحتوي على 500 ملي مولار من إيميدازول (مجموعة أدوات Spin Trap الخاصة به - GE Healthcare)؟

قمت بتصفية البروتين المنقى الخاص به في 200 ميكرولتر من محلول شطف يحتوي على 500 ملي إيميدازول. بعد ذلك ، أريد استخدامه لـ SDS-PAGE لتأكيد وجود شريط بروتين محدد خاص به على الجل. ماذا او ما.

حرقة من المعدة. هل هي علامة إنذار مبكر للسرطان؟

هل صحيح أن استخدام حاصرات H2 ومثبطات مضخة البروتون ومضادات الحموضة الأخرى يمكن أن يؤدي إلى تفاقم الحموضة المتكررة؟ يمكن أن يؤدي تأثير تقليل حمض المعدة أيضًا إلى جعل الجاسترين.

هلام الفصل لا يصلب. كيفية استكشاف الأخطاء وإصلاحها؟

هل من الضروري وضع أي سائل فوق خليط الهلام المنفصل المعالج بـ TEMED بين ألواح المباعدة بفواصل مدمجة 1.0 مم في إطار صب مغلق؟ إذا كانت الإجابة بنعم ، فما نوع السائل.

خطأ فادح

عندما حاولت تقليل طاقة نظامي ، حصلت على خطأ فادح على النحو التالي. خطأ فادح: لم يتم العثور على Atomtype opls_116 على الرغم من أنني قمت بالفعل بإضافة هذا السطر: قم بتضمين water #include "oplsaa.ff / spc.itp" إلى التوجيه [Molecultype] في طوبولوجي الخاص بي.

خطأ فادح

عندما حاولت تقليل طاقة نظامي ، حصلت على خطأ فادح على النحو التالي. خطأ فادح: لم يتم العثور على Atomtype opls_116 على الرغم من أنني قمت بالفعل بإضافة هذا السطر: قم بتضمين water #include "oplsaa.ff / spc.itp" إلى التوجيه [Molecultype] في طوبولوجي الخاص بي.

خطأ فادح

عندما حاولت تقليل طاقة نظامي ، حصلت على خطأ فادح على النحو التالي. خطأ فادح: لم يتم العثور على Atomtype opls_116 على الرغم من أنني قمت بالفعل بإضافة هذا السطر: قم بتضمين water #include "oplsaa.ff / spc.itp" إلى التوجيه [Molecultype] في طوبولوجي الخاص بي.

خطأ فادح

عندما حاولت تقليل طاقة نظامي ، حصلت على خطأ فادح على النحو التالي. خطأ فادح: لم يتم العثور على Atomtype opls_116 على الرغم من أنني قمت بالفعل بإضافة هذا السطر: قم بتضمين water #include "oplsaa.ff / spc.itp" إلى التوجيه [Molecultype] في طوبولوجي الخاص بي.

ما نوع السوائل التي يمكنني استخدامها في المصيدة التي لا تبطل أيضًا الاختبار الجزيئي؟

مرحبًا ، أريد أن أبدأ في اختبار مصيدة الوقوع للحصول على عينات من النمل ، لكني بحاجة إلى إجراء تحليل جزيئي على تلك الحشرات. إذن ، ما نوع السوائل التي يمكنني استخدامها؟ تنتهي صلاحية الإيثانول مبكرًا جدًا وأنا بحاجة إليه.


الجزء الأول: التعرف على أصباغ الطعام في الحلويات

يتم تلوين العديد من الأطعمة والأدوية ومستحضرات التجميل بشكل مصطنع باستخدام أصباغ غذائية معتمدة فيدراليًا (أصباغ FD و amp C). تشمل هذه الأصباغ الأحمر 40 ، الأحمر 3 ، الأصفر 5 ، الأصفر 6 ، الأزرق 1 ، والأزرق 2. نظرًا لأن كل صبغة لها طيف امتصاص وقمة يمكن تحديدها ، يمكن استخدام مقياس طيف ضوئي لتحديد أنواع صبغة FD و amp C المستخدمة في المنتج.

يمكن استخلاص الأصباغ من الأطعمة والمشروبات التي تحتوي على واحد أو أكثر من هذه الأصباغ. يمكن لطيف الامتصاص لهذا المستخلص بعد ذلك تحديد الأصباغ الموجودة في ذلك الطعام أو الشراب من خلال مقارنة قمم أقصى امتصاص بالمعلومات الواردة في الجدول أدناه. إذا كان طيف الامتصاص لمستخلص الطعام يبلغ ذروته عند 630 نانومتر وواحد عند 428 نانومتر ، فيمكنك افتراض أن الطعام يحتوي على كل من الأزرق # 1 والأصفر # 5. يعطي الجدول التالي الطول الموجي لذروة امتصاص كل من هذه الأصباغ.

الجدول 1. الطول الموجي لأقصى امتصاص لأصباغ FD و amp C شائعة الاستخدام

المواد

إجراء

أ. استخلاص الصبغة من كاندي (سيقوم مدرسك بذلك نيابة عنك)

ستحتاج إلى أنبوب اختبار واحد وكوفيت واحد لكل لون ليتم اختباره. قم بقياس 4 مل من الماء في أنبوب واحد. ضع 2-4 حلوى من نفس اللون في أنبوب اختبار مع الماء. دوّم بلطف وانتظر دقيقة واحدة. بعد ذلك ، صب ما يقرب من 1 مل من السائل في أنبوب ميكروسينتريفوجي. قم بتدوير أنبوب الطرد المركزي الدقيق بسرعة قصوى لمدة 60 ثانية. تأكد من توازن جهاز الطرد المركزي قبل الدوران. نقل السائل الشفاف (طاف) إلى كفيت. تأكد من ترك الجسيمات (الحبيبات) خلفها.

الشكل 4. منحنى الامتصاصية


طريقة جديدة للتثقيب الكهربائي باستخدام قطب كهربائي من النوع الشعري والسلك

يستخدم Electroporation على نطاق واسع لتحقيق تعداء الجينات. مشكلة شائعة في التثقيب الكهربائي هي أن لها صلاحية أقل من أي طريقة تعداء أخرى. في هذه الدراسة ، طورنا جهازًا جديدًا للتثقيب الكهربائي باستخدام طرف شعري وماصة كانت فعالة في مجموعة واسعة من خلايا الثدييات ، بما في ذلك خطوط الخلايا والخلايا الأولية والخلايا الجذعية. يقلل نظام التثقيب الكهربائي الشعري بشكل كبير من موت الخلايا أثناء التثقيب الكهربائي بسبب قطب كهربائي من النوع السلكي ، والذي يحتوي على مساحة سطح صغيرة. كما أشارت النتائج التجريبية إلى أن حيوية الخلية كانت تعتمد على التغير في الأس الهيدروجيني الناتج عن التحليل الكهربائي أثناء التثقيب الكهربائي. بالإضافة إلى ذلك ، أدى استخدام أنبوب شعري طويل وضيق جنبًا إلى جنب مع الماصات البسيطة إلى تقصير الوقت الإجمالي لعملية التثقيب الكهربائي بما يصل إلى 15 دقيقة ، حتى في ظل ظروف مختلفة مع 24 عينة. تم دعم هذه النتائج من خلال المقارنة مع نظام التثقيب الكهربائي التقليدي. تم تعزيز معدل ترنسفكأيشن وحيوية الخلية من خلال استخدام نظام الشعيرات الدموية ، والذي كان له معدل ترنسفكأيشن مرتفع بأكثر من 80٪ في خطوط الخلايا العامة مثل هيلا وكوس -7 ، وأكثر من 50٪ في حالة صعبة- تعدل الخلايا مثل الخلايا الجذعية أو الأولية. كانت الصلاحية تقريبًا 70-80٪ في جميع أنواع الخلايا المستخدمة في هذه الدراسة.


تعداء مقابل Electroporation لل

سواء باستخدام طرق تعداء قائمة على الكاشف الفيروسي أو غير الفيروسي ، أو الطرق الأكثر حداثة القائمة على الأدوات مثل التثقيب الكهربائي ، من الناحية النظرية ، يجب أن تكون النتائج متشابهة إلى حد ما. بغض النظر عن المسار الذي نسلكه للوصول إلى هناك ، يجب أن تكون الوجهة هي نفسها. ومع ذلك ، كما نعلم جميعًا ، هذا ليس هو الحال دائمًا. كلا الطريقتين يمكن أن تؤدي إلى نتائج. لماذا ا؟ وما هي الطريقة الأفضل؟

من حيث المرونة ، تسمح كلتا الطريقتين ببعض الاختلاف في العملية. كلاهما يتيح استخدام تطبيقات مختلفة للحصول على النتيجة المرجوة في النهاية ، لكننا بدأنا نرى اتجاهًا محددًا لتطبيقات محددة على وجه الخصوص. بالنسبة للترنس ، على سبيل المثال ، يُعتقد أن النواقل غير الفيروسية مثل الليبوبليكسات أكثر نجاحًا ولديها عوامل خطر أقل من النواقل الفيروسية. وفي التثقيب الكهربائي ، تُفضل عمليات التثقيب الكهربائي للخلية المفردة (SCEP) عادةً على عمليات التثقيب الكهربائي السائبة (BEP) نظرًا لارتفاع قابلية الخلية للحياة ، وزيادة كفاءة تعداء العدوى ، وانخفاض معدل التلوث.

مقارنة الطرق

ما مدى جودة عمل كل طريقة؟ عندما يتعلق الأمر بترنسفكأيشن ككل ، فإن بقاء الخلية وتسممها هما من الاهتمامات الأساسية. كلتا العمليتين معرضة لخطر انخفاض صلاحية الخلية. يعتبر ترنسفكأيشن ، على وجه الخصوص ، بسبب نسبة الكاشف تعداء غير صحيحة ، واستخدام الخلايا ذات الكثافة المنخفضة بنسبة 70 في المائة أو أقل ، وعدم كفاية تخزين كاشف تعداء (التي ينبغي أن تكون 39.2 درجة). تعتمد صلاحية الخلية في التثقيب الكهربائي إلى حد كبير على أشكال الموجة وقوة المجال وحجم فجوة الكوفيت وقطر الخلية ودرجة الحرارة وطول النبض وعدد النبضات ، ولكن قد تتأثر بالعديد من العوامل الأخرى.

يظهر الاختلاف الأساسي في عامل الخطر عند النظر إلى سمية الخلية. واحدة من أبرز المزايا التي تم الإعلان عنها بشكل جيد لاستخدام جهاز electroporator هي ، بالطبع ، أن هذه العمليات القائمة على الأجهزة تمكنت من تجنب العديد من المزايا الرئيسية لترنسفكأيشن القائمة على الكاشف الفيروسي أو غير الفيروسي ، بما في ذلك سمية الخلية. لسوء الحظ ، لا تزال سمية الخلية عاملاً مهمًا يجب مراعاته في تعداء القائم على الكاشف. يمكن أن تؤثر سمية الخلية بشكل كبير على النتائج ، وبعض الكواشف ، وخاصة عوامل تعداء الدهون ، معروفة جيدًا بتفعيل مسارات استجابة الإجهاد ، مما يؤثر على تنظيم الخلية.

بينما تسمح كلتا الطريقتين بنقل كل من DNA و mRNA ، إلا أن هناك مزايا وعيوب لكلتا الطريقتين يجب أن تؤخذ دائمًا في الاعتبار. الميزة الرئيسية للتثقيب الكهربائي ، على سبيل المثال ، هي أنها تفتخر بمستويات عالية من التكاثر ، في حين أن تكرار النتائج في تعداء العدوى القائمة على الكاشف يمكن أن يكون صعبًا ، بسبب الانقسامات والتغيرات في الخلايا. من ناحية أخرى ، يعتبر تعداء العدوى المعتمد على الكاشف حلاً أكثر فعالية من حيث التكلفة ، خاصةً عند استخدام فوسفات الكالسيوم أو البوليمرات الموجبة. الفروق الزمنية لحصاد الخلايا بين العمليتين لا تكاد تذكر.

أي طريقة تعداء هي الأفضل؟ إنه سؤال يصعب الإجابة عليه. ومع ذلك ، لا يخفى على أحد أن الكثيرين يختارون الآن استخدام Electroporation على تعداء على أساس الكاشف ، لأنه يفتقر إلى نفس المستوى من القيود التي يتمتع بها ترنسفكأيشن المعتمد على الكاشف ، وعلى الأخص فيما يتعلق بنوع الخلايا التي يمكن استهدافها. نحن نشهد أيضًا تحولًا بسبب القيود المفروضة على طول الحمض النووي الذي يتم إدخاله مع ترنسفكأيشن القائم على الكاشف ، وبسبب المشكلات الناشئة مع السلامة الأحيائية. ومع ذلك ، فإن ذلك لا يعني أن تعداء العدوى المعتمدة على الكاشف قد ماتت. بعيد عنه. في الواقع ، أحد أحدث الاتجاهات في تعداء العدوى هو تهجين التقنيات لزيادة الكفاءة والقدرة على البقاء ، وتقليل السمية والمخاطر الأخرى.

في VitaScientic ، يمكننا تقديم الحلول - بغض النظر عن الخيار الذي تقرره هو الأفضل لك.
لمعرفة المزيد حول نظام التثقيب الكهربائي ذو الأنبوب المختوم Celetrix الجديد والمبتكر: انقر هنا & gt & gt
للاطلاع على قائمة كاملة بأفضل كواشف نقل العدوى في الحمض النووي والتجارة و mRNA-in & trade: انقر هنا & gt & gt


شاهد الفيديو: What is Electroporation. Process of electroporation (قد 2022).